书城自然实验动物科学与应用
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第23章 动物实验基础知识(3)

385.处死实验动物也应采取安乐死吗?

处死实验动物应该采取安乐死。每个实验动物都是一个生命,并且为人类健康作出了贡献。对实验动物采取安乐死,不仅减轻了动物的痛苦,同时也减少了对实验结果的不利影响。处死实验动物,有的是因实验结束需采样检查,有时因实验中断而淘汰动物,或者为保护健康动物而处死患病动物。

一般应遵循如下动物安乐死的原则:①尽量减少动物的痛苦,尽量避免动物产生惊恐、挣扎、喊叫;②保证实验人员安全,特别是在使用挥发性麻醉剂(乙醚、安氟醚、三氟乙烷)时,一定要远离火源;③方法容易操作;④不能影响动物实验的结果;⑤尽可能地缩短致死时间,即安乐死开始到动物意识消失的时间;⑥判定动物是否被安乐死,不仅要看呼吸是否停止,而且要看神经反射、肌肉松弛等状况。

386.何谓“保定”?

为使动物实验或其他操作顺利进行而采取适当的方法或设备限制动物的行动,实施这种方法的过程叫保定。

387.处死实验动物的常用方法有哪些?

(1)化学药物致死法:此法适用于各种动物。可吸入二氧化碳、乙醚、三氯甲烷等致死,因乙醚易引起火灾,三氯甲烷对人的肝、肾及心脏有较大毒性,而二氧化碳不燃,无气味,对人很安全并且处死动物效果确切,故最好使用二氧化碳;也可静脉注射氯化钾溶液,家兔和犬的致死量分别为10%氯化钾5~10ml和20~30ml;也可皮下注射的士宁溶液,豚鼠致死量为3.0~4.4mg/kg,家兔为0.5~1.0mg/kg,犬为0.3~0.42mg/kg。

(2)断髓法:大鼠、小鼠常用此法。将动物放在鼠笼盖或粗糙的表面上,用左手拇指和食指用力向下按住鼠头,右手将鼠尾用力向后拉,使颈椎脱臼,鼠立即死亡。

(3)空气栓塞法:此法适用于较大动物,家兔处死常用此法。向动物静脉内注射入一定量的空气使之发生栓塞而死。使家兔和犬致死的空气剂量分别为20~40ml和80~150ml。该法虽被广泛使用,但因动物不会立即死亡,常出现长时间挣扎,从动物保护的角度出发,不提倡使用。

(4)急性失血法:小鼠等小动物可采用颈总动脉大量失血而致死的方法。犬等大型动物要先麻醉后放血,要使放血的切口保持通畅,一般在股三角区横切约10cm的切口,切断股动、静脉,使其大量失血而死。

(5)击打法:此法适用于大鼠、家兔等。抓住动物尾部提起,用力摔击头部,或用木棰用力捶其后脑部,都可将动物处死。

(6)断头法:此法适用于鼠类小动物。用大剪刀在颈部将鼠头剪断,动物立即死亡。

388.动物实验时对实验动物的基本要求是什么?

首先要从研究目的和实验要求来选择实验动物,进而考虑它是否容易获得,是否经济,是否容易饲养。一切实验动物应符合个体间的均一性、遗传的稳定性和容易获得三个基本要求。

389.选择实验动物应遵循哪些基本原则?

选择实验动物应遵循下列基本原则:①尽量选择研究对象的功能、代谢、结构及疾病性质与人类相似的动物;②选用解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物;③根据实验动物不同品种、品系的特点选择动物;④根据对实验质量的要求选择标准化的实验动物;⑤符合实验动物选择的一般原则;⑥经济性原则;⑦要考虑动物实验结果的外推;⑧实验动物的选择应用应注意有关国际规范。

390.实验动物选择的一般原则有哪些?

所谓实验动物选择的一般原则是指对实验动物的年龄、体重、性别、生理状况与健康状态以及实验条件的周密考虑和要求。

(1)年龄与体重:年龄是一个重要的生物量,动物的解剖生理特征和对实验的反应性随年龄的不同而有明显变化。一般而言,幼龄动物较成年动物敏感,而老龄动物的代谢、各系统功能较为低下,反应不灵敏。因此,一般动物实验应选用成年动物。但不同实验对年龄要求不尽相同,需根据课题的内容而定。一些慢性实验因周期较长,可选择幼龄动物。有些特殊实验如老年病学的研究,则考虑用老龄动物。

由于不同种类实验动物的生活周期差别很大,动物实验时还要注意“天文学时间”和“生物学时间”的区别。对不同动物而言,经过相同的天文学时间在生物学上却有不同的意义。例如,用犬做实验经过一年观察期和用大鼠做实验经过相同的观察期,其生物学意义是不同的。同样,用犬做实验从1岁到2岁的一年观察期和从12岁到13岁的一年观察期,其生物学意义也不同。考虑生物学时间,特别是在与老化有关的实验研究中很有意义。

值得注意的是,不同种属实验动物的寿命与人类具有很大差异。在发育上,有的以日月计龄,有的以年计龄。所以,选择动物时应注意到各种实验动物之间、实验动物与人类之间的年龄对应,以便进行分析比较。见表52、图51。

实验动物年龄与体重一般呈正相关性,可按体重推算年龄。例如KM小鼠6周龄时雄性约为32g,雌性28g;Wistar大鼠则雄性约为180g,雌性160g(图52、图53)。但体重大小常受每窝哺育仔数、饲养密度、营养、温度等环境条件所限,有时不一定准确,提供部门应有动物出生日期的记录以备查考。一般来说,选择的实验动物年龄、体重应尽可能一致,相差不得超过10%。若相差悬殊,则易增加动物反应的个体差异,影响实验结果的正确性。

(2)动物性别:不同性别的动物对同一药物的敏感程度是有差异的,如在猪瘟疫苗的效力实验中,雌兔比雄兔表现出较好的热反应,雌性小鼠对四环素毒素的耐受力低于雄鼠。

有人分析149种毒物对不同性别大小鼠的毒性,发现雌性的敏感性稍大于雄性,如雄性敏感性LD50为1,则雌性LD50大鼠和小鼠分别为0.88±0.036与0.92±0.085,如实验无特殊要求应选择雌雄各半做实验,以避免因性别差异所造成的结果误差。

(3)生理状态与健康状况:处于怀孕、哺乳等生理状态时,动物对外界刺激的反应常有所改变,如无特殊目的,一般应从实验组中剔除,以减少个体差异。健康动物对各种刺激的耐受性比有病的动物要大,实验时应剔除瘦弱、营养不良的动物。

(4)实验条件:实验条件对动物实验结果有很大影响,应给相应级别的动物有相应级别的环境条件,寒冷、炎热、通风不良、噪音或营养不良均会严重干扰动物实验的结果。

391.何为动物实验结果的外推?

医学研究中,动物模型、动物实验都是为人服务的,一切动物模型和动物实验结果都要外推到人身上去,这就是动物实验结果的外推。外推结论应在使用多种动物、多次、反复、科学地试验并分析之后才能作出。

392.如何选择不同微生物等级的实验动物?

选择何种微生物等级的实验动物,应根据各等级动物的特点,结合课题研究的水平、内容及目的而定。

一般而言,普通动物用于研究所获得的实验结果的反应性差,故主要用于生物医学示教或为某项研究进行探索方法的预试验。清洁动物是目前国内科研工作主要要求的标准实验动物,适用于大多数科研实验。SPF动物是理想的健康动物,用它来研究,可排除疾病或病原的干扰,适用于所有科研实验、生物制品生产及检定,是国际公认的标准实验动物。涉及具有国际交流意义的重大课题,最好选用SPF动物。无菌动物是一种非常规动物,仅是适用于特殊研究目的,如微生物与宿主、微生物间的相互作用,免疫发生发展机制,放射医学等方面的研究。由于无菌动物体内无任何可检出的微生物,使实验简洁明确,给课题研究带来极大方便。在精确试验中,鉴于动物体内外的寄生虫与微生物会干扰试验的结果,最好选择无菌动物或悉生动物,至少也应使用SPF级动物。

此外,还应考虑所选用的动物类别或级别要与实验条件、实验技术、方法及试剂等相匹配。既要避免用高精密度仪器、先进的技术方法、高纯度的试剂与低品质、非标准化、反应性能低的动物相匹配,又要防止用低性能的测试方法、非标准化的实验设施与高级别、高反应性能的动物相匹配,造成不必要的资源浪费。

393.如何判断实验动物的年龄?

实验动物年龄判断视动物种类不同而异,啮齿类动物的体重与年龄呈一定的正相关性,可按体重推算年龄,但体重大小常受每窝哺育仔数、饲养密度、营养、温度等环境条件所限,有时不一定准确,提供部门应有动物出生日期的记录以备查考。犬主要根据齿式判断;兔可根据爪的色泽、形态判定。

394.实验研究中应选择多大年龄的动物?

一般动物实验应选用成年动物。但不同实验对年龄要求不尽相同,需根据课题的内容而定。一些慢性实验因周期较长,可选择幼龄动物。有些特殊实验如老年病学的研究,则必须用老龄动物。

395.实验动物的性别对实验结果有影响吗?

不同性别的动物对同一药物的敏感程度是有差异的,如实验无特殊要求应选择雌雄各半做实验,以避免因性别差异所造成的结果误差。

396.可以使用怀孕、哺乳、患病、瘦弱及营养不良的实验动物吗?

处于怀孕、哺乳等生理状态时,动物对外界刺激的反应常有所改变,如无特殊目的,一般应从实验组中剔除,以减少个体差异。健康动物对各种刺激的耐受性比患病的动物要大,实验时应剔除瘦弱、营养不良的动物。

397.在选择实验动物时,何谓经济性原则?

经济性原则是指尽量选用容易获得、价格便宜和饲养经济的动物。实际工作中,选择实验动物还必须考虑课题经费有限性这一因素。在不影响整个实验质量的前提下,尽量做到方法简便和降低成本。这就涉及选用易于获得、最经济和最易饲养管理的实验动物。

398.实验动物结果的外推应注意哪些问题?

因为动物与人到底不是同一种生物,在动物身上无效的药物不等于临床无效,而在动物身上有效的药物也不等于临床有效。加之不同的动物有不同的功能和代谢特点,所以,肯定一个实验结果最好采用两种以上的动物进行比较观察。所选的实验动物中一种为啮齿类动物,另一种为非啮齿类动物。常用的实验序列是小鼠、大鼠、犬、猴或小型猪。用近交系动物作实验研究,结果易于重复并能进行定量比较,但不同品系具有各自不同的敏感特性,在近交系育成过程中所造成的近交衰退与人体的正常生理条件差异很大,所以对近交系动物的使用更要慎重,避免因滥用动物而导致外推于人的失误,从而造成难以想像的后果。

399.不同种类和环境中生活的动物尿液有哪些不同特点?

一般来说,淡水中生活的动物尿液是低渗的,海水中生活的动物尿液是等渗的,陆地上生活的动物尿液是高渗的,特别是沙漠中生活的动物,这种倾向性更明显。水分供给少的动物尿液以尿酸为主要成分,水分供给充足的动物尿液以尿素为主要成分,而水中生活的动物尿液则以氨为主。尿液的pH因动物食性不同而有差异。草食类动物尿液呈碱性、黏度高,而肉食类动物尿液呈酸性,且有特殊的臭味。

400.两栖类动物可用作哪方面的研究?

两栖类的蛙和蟾蜍,大脑很不发达,当然不能用于高级神经活动的研究,但在做简单的反射弧实验时,则很合适,因为最简单的反射中枢位于脊髓,而两栖类动物脊髓已发展到合乎实验要求的程度,且其结构简单明了,易于分析。

401.哪种动物适宜选做烧伤实验研究?

猪的皮肤组织结构与人类的相似,其上皮再生、皮下脂肪层、烧伤后的内分泌及代谢等也类似人类,故选用小型猪作烧伤实验研究较为理想。

402.在哪些研究中适宜用犬做试验?

由于犬易于驯养,饲养方便,适应性强,繁殖力高,且体形适中,易于操作,因而在众多科学实验中尤其是生物医学研究中应用广泛。主要应用于下列研究:

(1)实验外科学研究:犬广泛用于实验外科各个方面的研究,如心血管外科、脑外科、断肢再植、器官和组织移植等。临床医学在探索、研究新的手术或麻醉方法时,常选用犬进行动物实验,有成功的经验和熟练的技巧后再试用于临床。

(2)基础医学实验研究:犬是目前基础医学研究和教学活动中最常用的实验动物之一,特别是在生理、病理生理等实验研究中尤其如此。犬的神经系统和血液循环系统发达,适合进行此方面的研究。失血性休克、弥漫性血管内凝血、动脉粥样硬化特别是脂质在动脉血管壁中的沉积、急性心肌梗死、心律失常、急性肺动脉高血压、肾性高血压、脊髓传导试验、大脑皮层定位试验等许多实验研究往往选用犬作为实验动物。

(3)慢性实验研究:犬易于调教,通过短期训练即可较好地配合实验,故非常适合于进行慢性实验研究。条件反射试验、各种实验治疗效果试验、内分泌腺摘除试验(主要是甲状旁腺摘除试验)、慢性毒性试验常选用犬来进行。犬的消化系统也很发达,与人有相同的消化过程,所以特别适合于进行消化系统的慢性试验。

(4)药理学、毒理学及药物代谢研究:犬常用于多种药物在临床使用前的各种药理试验、代谢试验以及毒性试验,如磺胺药物代谢实验研究、新药毒性实验研究等。

(5)某些疾病研究:犬作为实验动物,常用于某些特殊疾病的研究,如进行先天性白内障、高胆固醇血症、糖原缺乏综合征、遗传性耳聋、血友病A、先天性心脏病、先天性淋巴水肿、肾炎、青光眼、狂犬病等研究。

此外,实验犬常用于行为学、肿瘤科学以及放射医学等研究领域。

犬的血液循环系统很发达,适合用于微循环的实验研究,如失血性休克、实验性弥漫性血管内凝血等。

403.动物的齿式与食性有关系吗?

齿式与动物的食性有密切关系,草食类和肉食类差异最为显着。草食类的臼齿上面扁平而且稍有一点凹状,而肉食类与此相反,呈凸状,面积小,这可能与咀嚼方式有关。草食类动物中,反刍动物没有上颚切齿,而兔的切齿外突,十分独特。

404.为什么说猪可能是心血管病研究的最好动物模型?

猪冠状动脉循环,在解剖学、血液动力学上与人类相似。对高胆固醇物的反应与人一样,很容易出现动脉粥样硬化典型病灶。幼猪和成年猪能自发动脉粥样硬化,其粥变前期可与人相似。老龄猪动脉、冠状动脉和脑血管的粥样硬化与人的病变特点非常相似。因此,猪可能是研究动脉粥样硬化最好的动物模型。此外,研究猪心脏病的病因和病理发生,可能对人类心脏病的研究有很高的价值。

405.哪些动物的盲肠比较大?

草食类动物日粮中粗纤维含量高而肉食类日粮中粗纤维含量很低,草食类比肉食类肠道长得多,特别是盲肠。盲肠长度也与肠内菌群有关。同种动物中,无菌动物盲肠较大。

406.微循环试验研究中如何选择实验动物?

进行外周微循环实验观察时,常选用小鼠耳廓、金黄地鼠颊囊、兔眼球结膜、兔耳廓透明窗等,还有用蝌蚪和金鱼的尾、青蛙的舌和蹼、蝙蝠和小鸡的翅、蜜蜂的眼、鼠背透明小室,以及兔的眼底、虹膜、鼻黏膜、口唇、牙龈、舌尖和鼓膜,还有大鼠的气管及其肩胛肌、提肌和猫的缝匠肌等进行实验。