实验目的
(1)熟悉各大类微生物菌落的形态特征。
(2)通过微生物菌落形态观察来识别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌等4大类微生物。
实验原理
区分和识别各大类微生物,通常包括菌落形态(群体形态)和细胞形态(个体形态)两方面观察。细胞的形态构造是群体形态的基础,群体形态则是无数细胞形态的集中反映,故每一大类微生物都有一定的菌落特征,即它们在形态、大小、色泽、透明度、致密度和边缘等特征上都有所差异,一般根据这些差异就能识别大部分菌落。
实验材料
(一)菌种
1.细菌
大肠杆菌(E。coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococus aureus)。
2.放线菌
细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)。
3.酵母菌
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、解脂假丝酵母(Candida lipolytica)、黏红酵母(Rhodotorula glutinis)。
4.霉菌
米曲霉(Aspergillus oryzae)、产黄青霉(Penicillinm chrysogenum)。
(二)培养基
察氏培养基(培养基22)、马铃薯琼脂培养基(培养基29)、牛肉膏蛋白胨培养基(培养基4)、麦芽汁培养基(培养基26)。
(三)未知菌的培养物
可将以上几种培养基暴露于空气中或用土壤稀释液等涂布后再经培养而成。
(四)仪器及其他用品
培养皿、三角烧瓶(250mL)、试管、接种针(环)、显微镜。
实验流程
倒平板→接种已知菌→接种未知菌→培养→镜检→比较→记录
实验步骤
(一)倒平板
将不同培养基熔化后,倒10~12mL于灭菌培养皿内,凝固后使用(用记号笔标记)。
(二)接种已知菌
分别用不同培养基平板,选取一株已知的细菌、放线菌、酵母菌,以划线法制成相应的已知菌平板;选取一株霉菌,用点种法制成已知菌平板。
(三)接种未知菌
分别用不同培养基平板,以空气暴露法或土壤稀释液涂布法制成未知菌平板。
(四)培养
将已知菌平板与未知菌平板培养于适温培养箱中,细菌、酵母菌培养1~3d,霉菌、放线菌培养3~7d。
(五)观察与比较
将上述4类菌经不同温度等条件培养后,分别进行观察,并以已知菌的一些菌落特征与各类未知菌的菌落特征进行比较和识别。
实验结果与报告
(1)已知菌菌落的形态特征。
(2)将未知菌菌落的辨别结果。
思考题
(1)细菌与酵母菌的菌落有何区别?
(2)如何区分霉菌与放线菌的菌落?什么是扩展性菌落?
(3)如何借助显微镜来观察菌落特征?
(4)影响孢子发芽率的因素有哪些?哪些实验步骤容易造成结果误差?