书城教材教辅乳品微生物学实验技术
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第53章 附录Ⅱ 常用染色液的配制

1.鞭毛染色液

(1)硝酸银鞭毛染色液

A液成分:单宁酸5g,FeCl31.5g,福尔马林(15%)2mL,NaOH(1%)1mL,蒸馏水100mL,冰箱内可保存3~7d,延长保存期会产生沉淀,但用滤纸除去沉淀后,仍能使用。

B液成分:AgNO32g,蒸馏水100mL将AgNO3溶解后,取出10mL备用。向其余的90mLAgNO3中滴入浓氨水,使之成为浓厚的悬浮液,再继续滴加氨水,直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用的10mLAgNO3慢慢滴入,则出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状沉淀又消失,再滴入AgNO3,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。冰箱内保存,通常10d内仍可使用。如薄雾重,说明银盐沉淀析出,不宜使用。通常在配制当天使用,次日效果欠佳,第3天则不能使用。

(2)改良利夫森(Leifson)鞭毛染色液

A液:20%单宁酸(鞣酸)2.0g。B液:饱和钾明矾液(20%)2.0mL。C液:5%石炭酸2.0mL。D液:碱性复红酒精(95%)饱和液1.5mL。

制法:将以上各液于染色前1~3d,按B加到A中,C加到A、B混合液中,D加到A、B、C混合液中的顺序,混合均匀,立即过滤15~20次,2~3d内使用效果较好。

2.改良Newman染色液(用于细菌和牛乳中体细胞染色)

溶液1:亚甲基蓝0.6g,95%乙醇54mL,三氯乙烷40mL冰醋酸6mL,将乙醇加入三氯乙烷,在通风橱中水浴加热,温度不要超过70℃。再将亚甲基蓝加入混合液,振摇至全部溶解。冷却,慢慢加入冰乙酸,过滤备用。

溶液2:碱性品红0.25mL,70%乙醇70mL,碱性品红溶解于乙醇溶液,过滤。

制法:将溶液1、2完全混匀,置于密封的瓶子。若不发生挥发,此溶液可长期保存。

3.革兰氏(Gram)染色液

(1)草酸铵结晶紫染色液

A液成分:结晶紫(crystal violet)2g,95%乙醇20mL。B液成分:草酸铵(ammoniumoxalate)0.8g,蒸馏水80mL。

制法:将结晶紫在研钵中研细,逐渐加入95%乙醇,继续研磨使其溶解,配成A液。将草酸铵溶解于蒸馏水中,配成B液。混合A、B两液,静置24~48h,过滤备用。此液不易保存,如有沉淀,需重新配制。

(2)鲁格尔氏(Lugol)碘液

成分:碘片1g,碘化钾2g,蒸馏水300mL。

制法:先将碘化钾溶解于3~5mL蒸馏水中,再将碘片溶解于碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分即成。配成后储于棕色瓶内备用,如变为浅黄色即不能使用。

(3)脱色液

95%的乙醇溶液或丙―醇溶液(95%的乙醇70mL,丙酮30mL)。

(4)番红(沙黄)复染液

2.5%番红(沙黄)乙醇溶液成分:番红(safranineO)2.5g,95%乙醇100mL。

制法:使用时,取上述配好的番红乙醇溶液20mL与80mL蒸馏水混匀即成。将2.5%的番红乙醇溶液作为母液,保存于密闭的棕色瓶中,临用时再稀释。

4.荚膜染色液

(1)黑色素水溶液(用于荚膜的背景染色)

成分:水溶性黑色素5g(或10g),蒸馏水100mL,福尔马林(40%甲醛)0.5mL。

制法:将黑色素在蒸馏水中煮沸5min,然后加入福尔马林作防腐剂,用玻璃棉过滤。

(2)墨汁染色液(用于荚膜的背景染色)

成分:国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL。

制法:选用上海墨水厂生产的“沪光绘图墨水”染色效果较好。先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用。

(3)1%甲基紫水溶液 称取甲基紫1g溶解于100mL蒸馏水中。

(4)1%结晶紫水溶液 称取结晶紫1g溶解于100mL蒸馏水中。

(5)6%葡萄糖水溶液 称取葡萄糖6g溶解于100mL蒸馏水中。

(6)20%硫酸铜水溶液 称取硫酸铜20g溶解于100mL蒸馏水中。

5.姬姆莎氏染色液(用于荚膜染色)

取姬姆莎氏染色粉末0.6g,加入50mL甘油中,置于55~60℃水浴箱中2h后,加入甲醇50mL,静置12h以上,过滤后即可应用。

6.酵母菌死活细胞的鉴别染色液

(1)0.1%美蓝染色液 称取美蓝0.1g,溶解于0.85%生理盐水中。

(2)0.05%美蓝染色液 称取美蓝0.05g,溶解于0.85%生理盐水中。

7.酵母菌子囊孢子观察染色液

(1)5%孔雀绿染色液 与芽孢染色液中孔雀绿染色液配法相同。

(2)95%乙醇 与革兰氏染色液中95%乙醇相同。

(3)0.5%沙黄染色液 与革兰氏染色液中2.5%沙黄复染色液配法相同。

8.酵母菌液泡观察染色液

(1)0.1%中性红水溶液 称取中性红0.1g,溶于蒸馏水中,定容至100mL。

(2)0.04%中性红水溶液 称取中性红0.04g,溶于蒸馏水中,定容至100mL。

9.吕氏碱性美蓝(亚甲基蓝)染液

A液成分:美蓝(methylene blue)0.3g,95%乙醇30mL。B液成分:KOH0.01g,蒸馏水100mL。

制法:分别配制A液和B液,配好后混合即可。

10.齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液

A液成分:碱性复红(basic fuchsin)0.3g,95%乙醇10mL。B液成分:石炭酸(苯酚)5.0g,蒸馏水95mL。

制法:将碱性复红在研钵中研细,逐渐加入95%乙醇,继续研磨使其溶解,配成A液。将石炭酸溶解于蒸馏水中,配成B液。混合A液和B液即成。通常可将此混合液稀释5~10倍使用。稀释液易变质失效,一次不宜多配。

11.乳酸石炭酸棉蓝染色液(用于霉菌固定和染色)

成分:石炭酸(苯酚)10g,乳酸(相对密度1.21)10mL,甘油20mL,棉蓝(cottonblue,又名苯胺蓝)0.2g,蒸馏水10mL。

制法:将石炭酸加入蒸馏水中,加热溶解,加入乳酸和甘油,最后加棉蓝,使其溶解即成。

12.瑞特氏染色液(用于荚膜染色)

取瑞特氏染色剂粉末0.1g加于乳钵内,加纯粹白色甘油1.0mL研磨均匀,再加入中性甲醇60mL,使其溶解后,置于棕色瓶中7d后过滤,装于棕色瓶中,保存于暗处。该染色液保存时间越久,染色的色泽越鲜艳。

13.芽孢染色液

(1)5%孔雀绿水溶液

成分:孔雀绿(malachite green)5g,蒸馏水100mL。

制法:将孔雀绿在研钵中研细,加入少许95%乙醇溶解,再加蒸馏水。

(2)0.5%番红(沙黄)染色液

成分:番红0.5g,95%乙醇100mL。

制法:与革兰氏染色液中2.5%番红复染液相同。